1 EFEK KOMBINASI EKSTRAK AKTIF DAUN POGUNTANO (Picria ...

1

EFEK KOMBINASI EKSTRAK AKTIF DAUN POGUNTANO (Picria fel-terrae Lour.) DENGAN DOXORUBICIN TERHADAP SEL KANKER

PAYUDARA SECARA IN VITRO

TESIS

Oleh:

PUJI LESTARI

NIM 117014004

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

2013

Universitas Sumatera Utara

2

EFEK KOMBINASI EKSTRAK AKTIF DAUN POGUNTANO (Picria fel-terrae Lour.) DENGAN DOXORUBICIN TERHADAP SEL KANKER

PAYUDARA SECARA IN VITRO

TESIS

Diajukan Sebagai Salah Satu Syarat Untuk Memperoleh Gelar Magister Dalam Ilmu Farmasi Pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara

Oleh:

PUJI LESTARI

NIM 117014004

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

2013


3

LEMBAR PERSETUJUAN TESIS

EFEK KOMBINASI EKSTRAK AKTIF DAUN POGUNTANO

(Picria fel-terrae Lour.) DENGAN DOXORUBICIN TERHADAP SEL KANKER PAYUDARA SECARA IN VITRO

Oleh:

PUJI LESTARI

NIM 117014004

Medan, Agustus 2014

Menyetujui:

Komisi Pembimbing, Komisi Penguji,

Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt. Prof. Dr. Urip Harahap, Apt.

NIP 195311281983031002 NIP 195301011983031004

Prof. Dr. Syafruddin Ilyas, M.Biomed. Dr. Marline Nainggolan, M.S., Apt.

NIP 196602091992031003 NIP 195709091985112001

Mengetahui: Disahkan Oleh:

Ketua Program Studi, Dekan,

Prof. Dr. Karsono, Apt. Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt.

NIP 195409091982011001 NIP 195311281983031002


4

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kehadirat Allah SWT, atas limpahan karunia dan rahmat-

Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan tesis ini. Penelitian ini bertujuan

untuk melakukan karakterisasi simplisia, skrining fitokimia, uji aktivitas

sitotoksik, uji kombinasi ekstrak aktif daun poguntano (Picria fel-terrae Lour.)

dengan doxorubicin, uji apoptosis dan uji selektivitas ekstrak aktif daun

poguntano. Tesis ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

magister farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih yang tulus kepada

Bapak Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Sumatera Utara (USU) dan sekaligus pembimbing pertama penulis,

serta Bapak Prof. Syafrudin Ilyas, M.Biomed., selaku pembimbing kedua penulis

yang telah memberikan waktu, bimbingan dan nasehat yang tak ternilai selama

penelitian hingga selesainya penyusunan tesis ini. Prof. Dr. Urip Harahap, Apt.,

dan Ibu Dr. Marline Nainggolan, M.Si., Apt., selaku dosen pembanding yang

telah memberikan masukan dan arahan kepada penulis dalam menyelesaikan tesis

ini. Bapak dan Ibu Staf Pengajar Fakultas Farmasi USU Medan yang telah

mendidik dan memberikan ilmunya yang berharga selama perkuliahan. Ibu

Kepala Laboratorium Farmakognosi, Dra. Suwarti Aris, M.Si., Apt., dan Bapak

Kepala Laboratorium Parasitologi Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada

(UGM), Prof. dr. Supargiyono, DTM&H., S.U., Ph.D., Sp.Par.(K)., serta Staf

yang telah memberikan bantuan dan fasilitas selama penulis melakukan

penelitian.


5

Penulis juga mengucapkan terima kasih dan penghargaan yang tiada

terhingga kepada Ayahanda Hartono dan Ibunda Rusmiati tercinta, yang tiada

hentinya berkorban dengan tulus ikhlas bagi kesuksesan penulis, juga kepada

adinda tercinta, Ns. Citra Septantris, S.Kep., dan Indah Tusikowaty, S. Ked. Serta

ucapan terimakasih kepada Denny Satria, S.Farm., M.Si., Apt., Abdi Wira

Septama, S.Farm., M.Sc., Drs. Panal Sitorus, M.Si., Apt., Cut Mayshitah, S.Farm.,

M.Si., Apt., dan Faisal Yusuf, S.Farm., M.M., Apt., atas bantuan dan motivasinya

selama penulis melakukan penelitian. Penulis menyadari bahwa penulisan tesis ini

masih belum sempurna, sehingga penulis mengharapkan kritik dan saran yang

membangun untuk penyempurnaannya. Harapan saya semoga tesis ini dapat

bermanfaat bagi ilmu pengetahuan kefarmasian dan mendorong penemuan obat-

obat antikanker yang bermanfaat bagi masyarakat luas.

Medan, November 2013

Penulis

Puji Lestari

NIM 117014004


6

DAFTAR ISI

Hal

JUDUL ......................................................................................................... i

LEMBAR PENGESAHAN ......................................................................... ii

KATA PENGANTAR ................................................................................. iii

ABSTRAK …………………………………………………………..... ..... v

ABSTRACT …………………………………………………………......... vi

DAFTAR ISI …………………………………………………….……....... vii

DAFTAR TABEL ……………………………………………….…........... xii

DAFTAR GAMBAR …………………………………………………....... xiii

BAB I PENDAHULUAN ……………………………………………...... 1

1.1 Latar Belakang ........................................................................ 1

1.2 Perumusan Masalah ................................................................. 4

1.3 Hipotesis .................................................................................. 5

1.4 Tujuan Penelitian ..................................................................... 5

1.5 Manfaat Penelitian …………………………………………... 6

1.6 Kerangka Pikir Penelitian …………………………………… 7

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ……..…….............................................. 8

2.1 Uraian Tumbuhan .................................................................... 8

2.1.1 Sistematika Tumbuhan ..…………………………….… 8

2.1.2 Nama Daerah ……......………………………………... 9

2.1.3 Nama Asing .…….….....……..………………………... 9

2.1.4 Morfologi Tumbuhan .....……….……………………... 9


7

2.1.5 Khasiat Tumbuhan ……………..……………………... 9

2.2 Ekstraksi ................................................................................. 10

2.3.1 Metode Ekstraksi ...……………………………...……. 10

2.3 Kanker ..................................................................................... 13

2.3.1 Siklus Sel ...……….....…………………….………….. 16

2.3.2 Karsinogenesis ………...…….....……………………... 18

2.3.3 Kanker Payudara ...……...……...……………………... 20

2.3.4 Sel MCF-7 ….…………………..……………………... 24

2.3.5 Sel T47D ..….…………………..……………………... 24

2.3.6 P-glikoprotein ……………….....……………………… 25

2.3.7 Resistensi Doxorubicin Terhadap Sel Kanker Payudara. 28

2.3.8 Uji Sitotoksik Menggunakan Metode MTT ...…….…... 30

2.3.9 Combination Index (CI) ………….....……………….... 30

2.3.9 Apoptosis dan Nekrosis ………….....…………………. 32

BAB III METODE PENELITIAN …………............................................. 37

3.1 Alat dan Bahan ....................................................................... 37

3.1.1 Alat ………..…………………………………………... 37

3.1.2 Bahan ………………………………………………….. 38

3.2 Identifikasi Tumbuhan ……………….................................... 38

3.3 Pengumpulan dan Pengolahan Bahan ..................................... 39

3.2.1 Pengumpulan Bahan …….……………………………. 39

3.2.2 Pengolahan Bahan ………………….…………………. 39

3.4 Pembuatan Pereaksi ……………………………………….... 39

3.4.1 Pereaksi Asam Klorida 2 N ……………….……….…. 39


8

3.4.2 Pereaksi Asam Sulfat 2 N ……………….………….... 39

3.4.3 Pereaksi Besi (III) Klorida 1% ………….……………. 39

3.4.4 Pereaksi Bouchardat …..................…………………… 40

3.4.5 Pereaksi Dragendorff …………………..……………... 40

3.4.6 Pereaksi Liebermann-Burchard ……………………….. 39

3.4.7 Pereaksi Mayer ……………….………………………… 40

3.4.8 Pereaksi Molish …………….……………………….….. 40

3.4.9 Pereaksi Natrium Hidroksida 2 N …………………..….. 40

3.4.10 Pereaksi Timbal (II) Asetat ………………………….... 41

3.5 Karakterisasi Simplisia ............................................................. 41

3.5.1 Pemeriksaan Makroskopik ……………………………... 41

3.5.2 Pemeriksaan Mikroskopik .……………………………... 41

3.5.3 Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Air ............................ 41

3.5.4 Penetapan Kadar Sari Larut Dalam Etanol ...................... 42

3.5.5 Penetapan Kadar Abu Total ............................................. 42

3.5.6 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam ........................ 42

3.5.7 Penetapan Kadar Air ....................................................... 43

3.6 Penapisan Fitokimia Senyawa Kimia ....................................... 43

3.6.1 Pemeriksaan Alkaloid ...................................................... 43

3.6.2 Pemeriksaan Flavonoid .................................................... 44

3.6.3 Pemeriksaan Saponin ....................................................... 44

3.6.4 Pemeriksaan Tanin ........................................................... 44

3.6.5 Pemeriksaan Glikosida .................................................... 45

3.6.6 Pemeriksaan Antrakinon ................................................. 45


9

3.5.8 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid .................................. 45

3.7 Pembuatan Ekstrak N-heksan, Etil Asetat dan Etanol Daun Poguntano ................................................................................ 46

3.8 Sterilisasi Alat dan Bahan ........................................................ 46

3.9 Pembuatan Media ..................................................................... 47

3.9.1 Pembuatan Media Roswell Park Memorial Institute ..... 47

3.9.2 Pembuatan Media Kultur Lengkap (MK DMEM) ......... 47

3.9.3 Pembuatan Media M199 ................................................ 48

3.9.4 Pembuatan Media Kultur Lengkap (MK M199) ............ 49

3.10 Penumbuhan Sel .................................................................... 49

3.10.1 Penumbuhan Sel MCF-7 .............................................. 49

3.10.2 Penumbuhan Sel T47D................................................. 50

3.10.3 Penumbuhan Sel Vero .................................................. 50

3.10.3 Subkultur Sel ................................................................ 51

3.10.4 Panen Sel ...................................................................... 51

3.10.5 Penghitungan Sel .......................................................... 51

3.11 Pembuatan Seri Konsentrasi Larutan Uji ............................... 53

3.12 Uji Sitotoksik ....................................................................... 53

3.13 Analisis Hasil ......................................................................... 53

3.14 Uji Kombinasi ........................................................................ 54

3.15 Uji Apoptosis .......................................................................... 57

3.15.1 Metode Flowcytometri .................................................. 57

3.16 Selectivity Index ...................................................................... 57

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ……............................................. 59

4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan …................................................ 59


10

4.2 Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak ….................................... 59

4.3 Hasil Skrinning Fitokimia Simplisia dan Ekstrak ................... 61

4.4 Ekstraksi ………………………................................................ 64

4.5 Uji Sitotoksik Ekstrak n-heksan, Ekstrak Etilasetat dan Ekstrak Etanol Daun Poguntano terhadap Sel MCF-7 dan T47D.......... 64

4.6 Uji Kombinasi ENDP – Doxorubicin terhadap MCF-7............ 67

4.7 Uji Apoptosis …………………................................................ 69

4.8 Selectivity Index. ..………….…................................................ 74

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .……............................................. 76

5.1 Kesimpulan …........................................................................ 76

5.2 Saran …………....................................................................... 76

DAFTAR PUSTAKA .................................................................................. 77

LAMPIRAN …………................................................................................. 84


11

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 4.1 Hasil karakterisasi simplisia daun poguntano ............................... 59

Tabel 4.2 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia ...................................... 61 Tabel 4.3 Hasil skrining fitokimia ekstrak ..................................................... 62 Tabel 4.4 Nilai CI doxorubicin dengan ENDP ............................................. 66


12

DAFTAR GAMBAR

Hal

Gambar 1.1 Diagram Kerangka Pikir Penelitian ……………………… 7

Gambar 2.1 Multitahap Karsinogenesis ……………...…….……….… 19

Gambar 2.2 Kanker Payudara ……………...…….…………………… 23

Gambar 2.3 Mekanisme Pemompaan oleh Pgp ………………………. 27

Gambar 4.1 Grafik Hubungan Antara Nilai IC50 Sel MCF7 dan T47D dengan Ekstrak …………………………………………... 65

Gambar 4.2 Grafik cell viability ……………...………………………. 66

Gambar 4.3 Gambaran presentase kondisi sel MCF7 kontrol ..………. 69

Gambar 4.4 Gambaran presentase kondisi sel MCF7 yang diberi ENDP ..………………………………………………….. 69

Gambar 4.5 Gambaran presentase kondisi sel MCF7 yang diberi

ENDP + Doxorubicin ………………………………….. 70 Gambar 4.6 Gambaran presentase kondisi sel MCF7 yang diberi

Doxorubicin .…………………………………………….. 70


1 EFEK KOMBINASI EKSTRAK AKTIF DAUN POGUNTANO (Picria ...

Documents

Transcript of 1 EFEK KOMBINASI EKSTRAK AKTIF DAUN POGUNTANO (Picria ...