39

Lampiran 1. Panjang Gelombang Maksimum pada Deksametason

40

Lampiran 2. Kromatogram Hasil Uji Linieritas

a. Kadar deksametason 10 µg/mL

b. Kadar deksametason 20 µg/mL

41

c. Kadar deksametason 30 µg/mL

d. Kadar deksametason 40 µg/mL

42

e. Kadar deksametason 50 µg/mL

f. Kadar deksametason 60 µg/mL

43

Lampiran 3. Perhitungan Pembuatan Kurva Baku

Pembuatan kurva baku diperoleh dari hubungan antara luas area (y) dengan

konsentrasi (x) yang menghasilkan persamaan garis regresi dan faktor korelasi (r). Berikut

ini merupakan persamaan garis regresi dari deksametason:

Y = 10289,15x+277808,13

Intersep (a) = 277808,13

Slope (b) = 10289,15

Koefisien korelasi (r) = 0,9990

y = 10289,15x + 277808,13r = 0,9990

0

200000

400000

600000

800000

1000000

1200000

1400000

1600000

10 20 30 40 50 60

Lu

as

Are

a

Konsentrasi µg/mL

Konsentrasi Luas Puncak Persamaan Regresi

10 385684 a = 277808,13

20 470289 b = 10289,15

30 588158 r = 0,9990

40 698955

50 796364

60 888120

44

Lampiran 4. Contoh Perhitungan Perolehan Kembali Deksaemtason dengan Metode

Standard Addition Method

1. Perolehan kembali pada sampel yang ditambahkan sejumlah 80% dari target kadar

analit dalam sampel:

a. Konsentrasi sampel sebelum penambahan baku (B)

1) Luas puncak = 698955

2) Kadar deksametason berdasarkan persamaan garis Y = 10289,15x +

277808,13 adalah 40,931 µg/mL

b. Konsentrasi bahan baku yang ditambahkan (C)

1) Luas puncak = 588158

2) Kadar deksametason berdasarkan persamaan garis Y = 10289,15x +

277808,13 adalah 30,163 µg/mL

c. Konsentrasi sampel yang diperoleh setelah penambahan bahan baku (A)

1) Luas puncak total analit 1 = 1010422

2) Luas puncak total analit 2 = 1010814

3) Luas puncak total analit 3 = 1118908

d. Berdasarkan persamaan garis Y = 10289,15x + 277808,13 maka :

1) Kadar total analit 1 = 71,205 µg/mL

2) Kadar total analit 2 = 71,241µg/mL

3) Kadar total analit 3 = 71,245 µg/mL

2. Perhitungan perolehan kembali

% perolehan kembali = A − B

Cx 100%

45

a. Analit 1

% perolehan kembali = 71,205 − 40,931

30,163 x 100%

= 100,37%

b. Analit 2

% perolehankembali = 71,241 − 40,931

30,163x 100%

= 100,49%

c. Analit 3

% perolehan kembali = 71,245 − 40,931

30,163x 100%

= 100,50%

46

Lampiran 5. Perhitungan LOD dan LOQ Deksametason Secara KCKT

No X Xi² Xi-X̅ (Xi-X̅)² Yi Yc (Yi-Yc) (Yi-Yc)²

1 10 100 -25 625 385684 380700 4984,37 24843944,3

2 20 400 -15 225 470289 483591 -13302,1 176946663

3 30 900 -5 25 588158 586483 1675,37 2806864,64

4 40 1600 5 25 698955 689374 9580,87 91793070

5 50 2500 15 225 796364 792266 4098,37 16796636,7

6 60 3600 25 625 888120 895157 -7037,13 49521198,6

X̅ 35 ∑9100 ∑1750

∑362708377

Dari persamaan regresi linier Y = 10289,15x+277808,13 maka Yc dapat dihitung :

Yc = 10289x kadar masing-masing larutan + 277808,13

1. Y = 10289,15x+277808,13

Y = 10289,15(10)+277808,13

Y = 380700

2. Y = 10289,15x+277808,13

Y = 10289,15(20)+277808,13

Y = 483591

3. Y = 10289,15x+277808,13

Y = 10289,15(30)+277808,13

Y = 586483

4. Y = 10289,15x+277808,13

Y = 10289,15(40)+277808,13

Y = 689374

5. Y = 10289,15x+277808,13

Y = 10289,15(50)+277808,13

Y = 792266

47

6. Y = 10289,15x+277808,13

Y = 10289,15(60)+277808,13

Y = 895157

7. Persamaan kurva baku Y = 10289,15x+277808,13 (r = 0,999)

Sy/x = { (Y i−Yc )2

n−2}1/2

= (362708376,7/4)1/2

= 9522,45

Sa = Sy x Xi

2

n (Xi − Xrata −rata )2

= 9522,45x 9100

6 x 1750

= 9522,45 x 0,93

= 8855,88

Perhitungan nilai LOD :

Nilai Y pada batas deteksi ditentukan dengan persamaan Y = YB+ 3 SB

Y = nilai intersept (a) pada persamaan kurva kalibrasi

SB = simpangan baku intersept (a) (Sa)

Y = 277808,13 + 3 (8855,88)

= 304375,77

Y = 10289,15x + 277808,13

304375,77 = 10289,15x + 277808,13

LOD = X = 2,58 µg/mL

48

Perhitungan nilai LOQ :

Nilai Y pada batas kuantifikasi ditentukan dengan persamaan Y = YB + 10 SB

Y = nilai intersep (a) pada persamaan kurva kalibrasi

SB = simpangan baku intersept (a) (Sa)

Y = 277808,13 + 10 (8855,88)

= 366366,93

Y = 10289,15x + 277808,13

366366,93 = 10289,15x + 277808,13

LOQ = X = 8,61 µg/mL

49

Lampiran 6. Contoh Perhitungan Kadar Deksametason

Persamaan regresi linier kurva baku adalah :

Y = bx+a

Y = 10289.15x + 277808.13

Replikasi 1

Y = 10289.15x + 277808.13

792858 = 10289.15x + 277808.13

X = 50,508 µg/mL

Faktor pengenceran 2x sehingga kadar deksametason adalah

X = 50,508 x 2

= 100,115 µg/mL

Kadar deksametason dalam 1 ml sampel (mg) = 100,115 µg/mLx 10 mL

1000

= 1,00115 mg

% kadar deksametason = 1,00115

1 x 100%

= 100,115%

50

Lampiran 7. Surat Permohonan Bahan Baku

51

Lampiran 8. Certificate of Analysis Deksametason

52

Lampiran 9. Surat Keterangan Telah Melakukan Penelitian di Laboratorium Kimia,

Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim

53

Lampiran 10. Gambar Alat-Alat yang Digunakan pada Saat Penelitian

Komponen/alat KCKT (Jasco) Spektro UV-Vis (Shimadzu)

54

Vortex mixer (Health) Vakum pump (Rocket)

55

Lampiran 11. Sampel Penelitian Tetes Mata Deksametason 5 ml