1

KINETIKA ENZIM

Penting untuk :Memahami fungsi katalitikMemahami fenomena biologik,

pengaruh suhu, pH dll.Prosudur pemurnian enzim

2

Pengukuran aktivitas enzim:

Berdasar pada aktivitasnya.1 IU, micromol P/menit

Pada enzim tertentu :1 IU, perobahan kepekatan pada 340nm

sebesar 0,001 per menit

Kecepatan reaksi :jumlah substrat yg diubah per satuan waktujumlah produk yg terbentuk per satuan waktu

3Kurve Perjalanan dari suatu reaksi enzimatik

0 t0

S

P( )

S

P( )

4

t0

S

P( )

A

BC

A’ B’ C’

Kec di 0 = tg

__=

= A__A’ = Kec di A

Kec di B = tg

Kec rata-ratad i B = B__

B’Kec rata-rata

Cdi CC’

5

Kecepatan awal :Pada waktu kadar substrat, produk dan enzim,suhu, pH dapat diketahui dengan tepat.Pada awal reaksi.Pada waktu kurve perjalanan masih lurus.Biasanya berkurangnya substrat < 10%.

Cara mengukur kecepatan awalAmbil bagian pada kurve perjalanan yang masihBerupa garis lurus (pada awal reaksi)

Kecepatan awal berbanding lurus dengan kadar enzim

6

Pengaruh kadar substrat terhadap reaksi enzimatik

Melakukan beberapa kali percobaankondisi sama kecuali kadar substratKadar substrat absis ( x )Kecepatan awal Vo ordinat ( y )Kurve berbentuk hiperbola

7

Persamaan Michaelis-Menten

Vomax [S]Vo= ----------

Km + [S]

Apabila [S] <<< Km

[S] >>> Km

[S] = Km

8

[S] <<< Km

9

10

Double reciprocal atau Lineweaver-Burk plot

11

Pengaruh pH terhadap reaksi enzimatik

• pH mempengaruhi muatan• Muatan mempengaruhi struktur enzim• Selanjutnya akan mempengaruhi

reaksi E S• Akibatnya kecepatan reaksi

dipengaruhi

12

CO

O HCN

+H

3

R

CO

OCN

+H

3

R-

CO

OCNH

R-2

pH = 3pH = 7

pH = 11

13

Pengaruh pH

1)PepsinpH optimum 1,6

2) Glukosa 6 fosfatasepH optimum 7,8

14

Pengaruh temperaturMakin tinggi temperaturMakin mudah rusak

Enzim lebih stabil padaTemperatur yang rendah

5060

7040

80

0C

0C

0C

0C

0C

S

P( )

S

P( )

t0 t2

Suhu

t__S

8040 6050 7000 0 0 0

V Rata-rata

=t

__S

15

INHIBITOR

Berdasar ikatan enzim :-inhibitor reversibel-inhibitor irreversibel

Berdasar sifat kinetika :-inhibitor kompetitif-inhibitor nonkompetitif

16

INHIBITOR KOMPETITIF

• Selalu bersifat reversibelE + I EI ES + I

E EI

ES E P++

17

Inhibitor kompetitif reversibelEfeknya dapat dihilangkan dengan menambah substratAnalog substrat :Strukturnya mirip substrat

IS

SI

Terikat di aktif site

18

COOHHOOCAs. Fumarat

COOHCCCOOH

HH

2

2

As.Suksinat

Suksinat dehidrogenase

COOHCC

COOH

HH

2

2

CH2

As.Glutarat

COOHCCOOH

H 2

As.Malonat

COOHCOOH

As.Oksalat

CHC

COOH

H

2

3

As.Propionat

19

20

21

Inhibtor nonkompetitif :

a) Inhibitor nonkompetitif reversibel

E + I EI ES + I ESIDpt berikatan dgn E bebas juga dengan ES komplek

Terikat tidak pada aktif siteStrukturnya tidak mirip substrat

E S

I

22

23

24

Inhibitor nonkompetitif irriversibel

Berikatan dgn enzim secara irriversibelMerobah seluruh konformasi enzimEnzim menjadi inaktifSecara kinetika mirip nonkompetitif reversibelMenurunkan VmaxTidak menurunkan Km

Contoh : Hg++, Ag++, Ba++