Ketrampilan Dasar LaboratoriumKetrampilan Dasar Laboratorium

Program Program StudiStudi IlmuIlmu Biomedik 20Biomedik 201111

Kuliah 4: Oktober 5, 2010

Pengenceran “revisited”

OpenWetWare…file names

Spektrofotometri

Praktikum Metabolisme

PengenceranPengenceran::

The ratio a:b is generally defined as the quotient (a/b) and is described as a in b.2–4 However, it may also be expressed as a to b.5,6 [meaning]…the sum a+b.

a:ba:b Fishel, L.A. 2010. Dilution Confusion: Conventions for Defining a Dilution Journal of Chemical Education 87:183-1185.

2. Kaplan LA, Pesce AJ, eds. Clinical Chemistry: Theory, Analysis, Correlation. 5th ed. St Louis, Mo.: Mosby Elsevier; 2010:32. 3. Troy DB, ed. Remington—The Science and Practice of Pharmacy. 21st ed. Philadelphia, Pa.: Lippincott Williams & Wil­kins; 2006:119. 4. Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE, eds. Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4th ed. St. Louis, Mo.: Elsevier Saunders; 2006:27.

5. Darton M, Clark J. The Macmillan Dictionary of Measurement. New York, NY: Macmillan Publishing Co.; 1994:378. 6. The Random House Dictionary of the English Language. 2nd ed., unabridged. New York, NY: Random House; 1987: 1602.

PengenceranPengenceran::

Untuk mata kuliah Ketrampilan Dasar Laboratorium, a:b selalu diartikan a/a+b

a:ba:b

1:1 pengenceran 50% atau 1/2 dari awalnya

1:3 pengenceran 25% atau 1/4 dari awalnya

2:3 pengenceran 40% atau 2/5 dari awalnya

1:9 pengenceran 10% atau 1/10 dari awalnya

1:10 pengenceran <10% atau 1/11 dari awalnya

Filenames in Filenames in OpenWetWareOpenWetWare

Praktikum 4: Metabolisme I dan Spektrofotometri

Bahan Praktikum Metabolisme I dan

Spektrofotometri

Artikel Dasar Kegiatan Praktikum Metabolisme di sini

Tugas Mahasiswa (laporan) Praktikum 4

Tolonglah nama file Anda termasuk nama Anda/kelompok

Anda sendiri

Contoh: "Abdi dan Mustafa laporan praktikum

metabolisme dan spektrofotometri.pdf“

??Apakah email sudah sampai??

SpectrophotometrySpectrophotometry Basic Ideas:

i) If a molecule absorbs a

photon of electromagnetic

radiation, its energy level

will riserise EXCITED

STATE

ii) a molecule may vibrate in

many ways, so there are

many vibrational vibrational levelslevels

iii)Absorption (and emission)

of energy is quantal (yaitu

set values)

Energy Level Diagram

Basic ideas.....Basic ideas.....

iv) Electromagnetic Spectrum: relationship between

energy and wavelength

E = hc/ (h Planck’s constant=4.13566733×10−15 eVs)

UV and visible spectrum (~200-800nm) berguna

bagi penelitian molekul-molekul electronic

transitions

X-ray or -ray energy tinggi molekul

dihancurkan/kanker

IR energi agak rendah mendapat keterangan

tentang struktur molekul (rotational or

vibrational transitions)

UV and visible spectrum (~200-800nm)

λ semakin kecil

energi semakin besar

** skala logarithmik**

Ada molekul/unsur yang dapat menyerap cahaya langsung pada

200nm < λ > 800nm misalnya: DNA atau protein

Absorption Spectra of DNA and proteinAbsorption Spectra of DNA and protein

DNA and protein absorb energy in the UV region

(DNA pada =260nm; protein pada =280nm)

HasilHasil SpektrofotometriSpektrofotometri DNADNA

SpektraSpektra absorpsiabsorpsi glukosaglukosa dandan kolesterolkolesterol

diambil dari: https://fscimage.fishersci.com/images/D10972~.pdf Enzymatic Colorimetric Methods for the Analysis of Human Serum by UV-Visible Spectroscopy, Keppy et.al., Thermo Fisher Scientific

standar standar

sempel

sempel

λ (nm) λ (nm)

sera

pan

sera

pan

glukosa kolesterol dasarnya: H2O2 bereaksi dengan fenol, 4-amino-antipirin serta

peroksidase derivatif kuinonimin yang berwarna merah.

Protein dapat diukur dgn reagensia Biuret

0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.35

0.4

480 500 520 540 560 580 600 620

panjang gelombang (nm)

se

rapa

n

Puncak serapan pada

≈520 nm

Serapan cahaya dibanding dengan panjang gelombang cahaya

pada reaski reagensia Biuret dengan protein

data yg diperoleh pada praktikum BM506 2009

Alat Spektrofotometer :

A = dc

% transmission = 100 x (Io/I)

hubungan antara transmisi cahaya (I/ Io) dgn konsentrasi sempel

d

Io I

Io= intensitas cahaya yang masuk

I = intensitas cahaya yang keluar

d = jarak larutan yang dilalui cahaya (cm)

c = konsentrasi larutan (mole/litre atau M)

= molar absorption coefficient (M-1cm-1)

log10(Io/I) = -dc

tapi lebih praktis untuk mengunakan konsep serapan

(absorbance) dimana , A = -log10(Io/I)

d

Io I Io= intensitas cahaya yang masuk I = intensitas cahaya yang

keluar

A = -log10(Io/I)

Kalau 0% cahaya diserap sempel??

Io= I A = -log10(1) A = 0

Kalau 50% cahaya diserap sempel??

Io> I A = -log10(2) A = 0,3

Kalau 99,9% cahaya diserap sempel??

Io>> I A = -log10(1000) A = 3

Kalau nilai A yang diperoleh > 1,5 Kalau nilai A yang diperoleh > 1,5

sebaiknyasebaiknya sseempel diencerkanmpel diencerkan dulu agar dulu agar

hasilnya lebih akurat/ dapat dipercayahasilnya lebih akurat/ dapat dipercaya

2

Hukum Beer-Lambert

A = dc

Hukum Beer-Lambert benar pada konsentrasi yang berbanding lurus

dengan A

Basic operation:

i) pakai sempel blanko dan sempel yg lain

ii) sempel blanko dimasukkan dulu untuk dinulkan sinyal pada

yg sedang digunakan

iii) sempel yg lain diperiksa pada yg sama.

iv)serapannya dibaca

spektrofotometerspektrofotometer

Mode

(transmittance or absorption)

Wavelength adjustment Cuvette holder

100%T (0 absorbance)

adjustment On/Off

kuvet

PraktikumPraktikum 44

MetabolismeMetabolisme I (I (glukosaglukosa, ,

trigliseridatrigliserida, urea) , urea) dandan

TeknikTeknik SpektrofotometriSpektrofotometri

Kelompok praktikum

Bagian praktikum

Pengenceran

Grafik-grafik

Laporan/Proposal Metabolisme II

KelompokKelompok PraktikumPraktikum

18

KelompokKelompok 1 (1 (masukmasuk pkpk 08:00):08:00):

Dedy Ernawati

Mara Imam Fera Roy Taufik

Martina Lily Dorra Anwar

KelompokKelompok 2 (2 (masukmasuk pkpk 12:00):12:00):

Taya Elsa Leo Yeni Dita

Musthari Ningrum Donny Siti

Sukaisi

Grup praktikum ditentukan setiap hari praktikum

Cara Cara kerjakerja........

1. Pengenceran - doubling dilution dan decimal dilution dari larutan stok glukosa dan urea (meja 1,3,5 mengerjakan pengenceran larutan stok urea dan meja 2,4 mengerjakan pengenceran larutan stok glukosa)

2. Sempel darah diambil (boleh semua mhs, paling sedikit seorang dari grup meja Anda). 1ml darah cukup.

3. Darah disentrifugasi biar serum dapat diambil

4. Kerjakan pemeriksaan glukosa, trigliserida serta urea pada sempel serum sesuai dengan prosedurnya

Cara Cara kerjakerja........

GLUKOSA TRIGLISERIDA UREA

volume

reagensia kit

1000l

reagensia

glukosa

1000l

reagensia R2

1000l

reagensia A,

kemudian

1000l

reagensia B

volume

sampel 10l 10l 10l

konsentrasi

standard kit 100mg/dl 200mg/dl 40mg/dl

periode dan

temperatur

inkubasi

10 min @

37C 5 min @ 37C

5 min @ 25C

** 2X**

periksa pada λ 500nm 530nm 600nm

HasilnyaHasilnya........ Tabel 1a s/d 2b

faktor konsentrasi grup meja__ grup meja__

1

2

4

8

16

32

64

128

blanko

konsentrasi

se

rap

an

Hitung garis regresi (linear regression) pada data yg diperoleh. Rumus yang dihasilkan berbentuk

y= mx + b dimana y = serapan; x = konsentrasi dan “m” merupakan slope

HasilnyaHasilnya........ Tabel 3

GLUKOSA UREA

mhs: ______

mhs: ______

mhs: ______

mhs: ______

Serapan sempel

dari grafik 1a/2a

dari grafik 1b/2b

dari rumus kit

maksudnya dari rumus garis regresi y= mx + b

} contoh urea:

Asempel/Astandar x 40mg/dl

HasilnyaHasilnya........ Tabel 4 Hasil pemeriksaan glukosa, trigliserida dan urea plasma mahasiswa

data kelas

se

rap

an

detil2 mhs (berapa lama sejak makan; rata-rata apa yg dimakan; jenis kelaminan; umur)

GLUKOSA TRIGLISERIDA UREA

A kadar A kadar A kadar 1.

2.

3.

LaporanLaporan dandan proposal proposal MetabolismeMetabolisme IIII

Laporan * satu laporan per grup meja 1-2 halaman selain Tabel 3 dan 5 grafik

kata-kata sendiri

perubahan yang ada dicatat

3 kesimpulan dari setiap grafik (5 grafik yang berdasar Tabel 1a, 1b, 2a, 2b serta Table 4)

komentar atas kebuktian (atau tidak) Hukum Beer-Lambert

komentar atas hasil pada Tabel 3.

saran

LaporanLaporan dandan proposal proposal MetabolismeMetabolisme IIII Proposal untuk Praktikum Metabolisme II (dibuat masing-masing)

Dari data dan pengalaman Anda pada praktikum ini, pikirkan suatu hipotesis dan mendesain suatu percobaan yang bisa membuktikan hipotesis Anda itu benar atau tidak dan yang bisa diuji dalam konteks praktikum (ingatlah keterbatasan waktu dan alat!!)

Siapkan cara kerja/proposal yang lengkap dan jelas

proposal akan dikumpulkan (secara hardcopy) pada UTS (tgl 10 Nopember)

akan dikomentar dikembalikan kepada Anda sebelum akhir bulan Nopember.

Anda boleh bergabung dengan seorang mhs lain (terserah Anda) sebagai grup meja untuk praktikum Metabolisme II dan boleh memilih satu proposal di antara kalian berdua untuk mengerjakan bersama-sama pada jam praktikum pada tgl 15 Desember 2011.

UTS Praktek Ketrampilan Praktikum UTS Praktek Ketrampilan Praktikum

Akan dilaksanakan pada

Hari Kamis tgl 10 November

pk 08:30 s/d selesai

Bentuknya: per orang 45 menit

15 menit sempat membaca soal-soal

15 menit kegiatan praktek laboratorium

15 menit kegiatan praktek data analisis

Bahan ujian: semua bahan kuliah & praktikum

*diperbolehkan Anda bawa bahan praktikum

atau catatan lain. Jangan lupa pengaris,

pensil, penghapus, balpoin (pasti bertugas

buat grafik! – kertas grafik disediakan kami)

ReferencesReferences::

Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. & Walter, P. 2008. Molecular Biology of the Cell (5th ed), Garland Science, Taylor & Francis Group, New York.

Southeastern Universities Research Association (www.sura.org)

Dunn, S.M.J. 1990. PMCOL 306 Course Notes, University of Alberta Pharmacology Department

Holme, D. J. & Peck, H. 1998. Analytical Biochemistry (3rd ed), Addison Wesley Longman Inc., New York.